إعداد القياسية:
إعداد معيار الأسهم المختلطة عن طريق وزنها بدقة (± 0.01 ملغ) حوالي 10 ملغ من كل معيار مرجعي كافالاكتون في قارورة حجمية 10 مل. إضافة 7.0 مل من الميثانول وسونيكات حتى يذوب. تمييع لحجم مع الميثانول وتخلط.
إشعار: بدلاً من ذلك ، قم بإعداد معيار مخزون kavain بطريقة مماثلة واستخدم عوامل استجابة kavalactone لتقدير حجمها.
تمييع معيار الأسهم لإنشاء ما لا يقل عن أربع نقاط منحنى القياسية. التخفيفات القياسية المقترحة للسهم هي 1:10 و 1:25 و 1: 100 باستخدام الميثانول.
إشعار: تخزين المعايير في درجات الحرارة المبردة (0 - 5 درجة مئوية). تتحلل كافالاكتونز بسرعة بعد 48 ساعة. يوصى بإعداد معايير مرجعية جديدة قبل كل تحليل.
جهاز
· معايرة التوازن التحليلي الدقيق إلى mg 0.01 ملغ
· قارورة ، حجمي ، فئة أ ، أحجام متنوعة
قارورة ، اللوني مع غطاء
· نظام كروماتوجرافي سائل عالي الأداء كما هو موضح في فصل جامعة جنوب المحيط الهادئ. تحقق وتوثق أن الأجهزة والبرامج والأنظمة الفرعية تفي بمتطلبات الأداء لمؤهلات التثبيت / تأهيل التشغيل (IQ / OQ).
· فلتر ، 0.45 ميكرون ، نايلون جيلروديسك (P / N 4426) ، البولي بروبلين Whatman Puradisc ™ (Cat. رقم 6788-2504) ، Whatman GD / X Glass (Cat. رقم 6894-2504) أو Sonicator
· عمود ، YMCbasic ، 5 ميكرون ، 4.6 × 250 مم (Cat. رقم BA99S05-2546WT). عمود مكافئ ، YMC J'Sphere H80 ، 4µ ، 4.6 × 250 (Cat. رقم JH08S04-2546WT).
الكواشف
· المياه ، HPLC الصف أو Nanopure
الميثانول ، HPLC الصف
· الأسيتونيتريل ، HPLC الصف
· حمض الفوسفوريك ، ACS كاشف الصف
إعداد عينة:
المواد النباتية
يزن بدقة (± 0.1 ملجم) حوالي 750 ملغ من مادة جذعية مقشرة أو مقشرة أو دقيقة.
ضع المادة في قارورة حجمية 50 مل مع 40 مل من الميثانول / الماء (70/30). يصوتن لمدة 60 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
اسمح للقارورة بالتبريد إلى درجة حرارة الغرفة وتخفف من الحجم باستخدام الميثانول / الماء (70/30) وتخلط.
تصفية ووضع عينة في قارورة HPLC وقبعة.
استخراج مسحوق وناعمة (لصق)
تزن بدقة (± 0.1 ملغ) حوالي 100 ملغ من المستخلص في قارورة حجمية 50 مل. (يعتمد وزن 100 مجم على محتوى كافالاكتون 50-60٪ في المستخلص.) إشعار: تجانس المستخلص بعناية قبل أخذ العينات. يتم ذلك عن طريق وضع المستخلص في حاوية مغمورة في حمام مائي ساخن من 60 درجة إلى 80 درجة مئوية حتى التدفق الحر.
أضف 40 مل من الميثانول وسونيكات لمدة 10 دقائق أو حتى تذوب جميع المواد الصلبة.
اسمح للقارورة بالتبريد إلى درجة حرارة الغرفة وتخفف من الحجم باستخدام الميثانول وتخلط.
تصفية ووضع عينة في قارورة HPLC وقبعة.
عينات مسحوق
غالبًا ما يتم خلط مستخلص الكافا أو تجفيفه بالرذاذ على حاملات مختلفة. لفحص عينات المسحوق بنجاح ، من الضروري تطوير خطوة إعداد العينات التي تسترد الكافالاكتونز من الناقل. يمكن تحقيق ذلك من خلال الاستخراج الأول بالميثانول النقي أو الماء.
ظروف الكروماتوغرافي:
العمود: YMCbasic ، 5 ميكرون ، 4.6 × 250 مم
درجة حرارة العمود: 40 درجة مئوية
معدل التدفق: 0.6 مل / دقيقة لل YMCbasic ؛ 1.0 مل / دقيقة لـ J'Sphere
المرحلة المتنقلة: حمض الفوسفوريك بنسبة 0.1 ٪: كحول الأيزوبروبيل: الأسيتونيتريل (64:16:20 ت / ت)
الاكتشاف: 220 نانومتر (246 نانومتر بدلاً من ذلك لتحسين الانتقائية)
حجم الحقن: 5 ميكرولتر
وقت التشغيل: 30 دقيقة
إجراء:
إعداد الحلول القياسية المرجعية والاستعدادات العينة وفقا لتوجيهات.
جعل حقنة واحدة من استخراج المذيبات فارغة.
جعل حقن واحدة من الاستعدادات القياسية.
قم بإنشاء مخطط خطي لمناطق الذروة القياسية مقابل التركيزات القياسية.
جعل الحقن واحدة من الاستعدادات العينة.
حساب تركيز كافالاكتون في العينة.
ملائمة النظام:
يجب أن يكون معامل الارتباط للانحدار الخطي هو .90.999. يجب أن يكون القرار بين قمم desmethoxyyangonin و yangonin ≥1.8.
شنشى ص هيرب التكنولوجيا الحيوية المحدودة